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LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

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LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞 詳細(xì)資料

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

商品屬性

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

鑒定

STR鑒定正確

種屬

生長特性

貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣

規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

分類

人細(xì)胞系

 

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

商品介紹

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

種屬來源:人

性別年齡:男性,50

生長特性:貼壁生長

細(xì)胞形態(tài):上皮樣

細(xì)胞規(guī)格:1 X 106cells/T251 mL凍存管

培養(yǎng)條件:DMEM/F12(4:1) + 10% h.i. fetal bovine serum (FBS) + 0.100 μg/mL Insulin + 275 ng/mL Triiodothyronine + 88.6 ng/m Lapo-Transferrin + 4.9ng/mL dBiotin + 251.8 ng/mL Adenine37 , 5% CO??


細(xì)胞處理:

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟:

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞
(1)當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時,進(jìn)行傳代。

(2)吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次,搖勻后棄掉。

(3)加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

(4)培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化,3min左右拿出,用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量,發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落,加入2倍量的中止消化,并吹打均勻,避免消化過度。

(5)細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi),1000rpm/min離心3~5min。

(6)吸棄上清,加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,吹打細(xì)胞使其均勻分散。

(7)吸棄細(xì)胞懸液,選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻,放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

(8)根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

(9)細(xì)胞凍存

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

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細(xì)胞接收后的處理:

LNCaP C4-2B人前列腺癌細(xì)胞
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。


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