細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

Detroit 562 (人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞)

商品屬性

商品介紹

別稱 DETROIT 562; Detroit-562; Detroit562; DETROIT562; Det 562; Det. 562; D562

種屬 人類

年齡（性別） 女性，成人

組織來源 器官：咽頭；疾病：癌；取材轉(zhuǎn)移灶：胸水

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

參考資料(來源文獻(xiàn))

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達(dá)情況 keratin

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)檢測試劑盒 ，英文名： CTNNβ1 ELISA Kit

Mouse inhibin B (INH-B) ELISA Kit 小鼠抑制素B(INH-B)檢測試劑盒

RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGal(HumanAlpha-galactoyl)ELISAKit人α半乳糖基抗體

細(xì)胞胱(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

RatProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit大鼠前列腺素F2α(PGF2α)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

SERPINB8重組小鼠 SerpinB8 蛋白 Protein

BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A 0.5mgBMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受體1A抗原

NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽) Protein

F13B Protein Human 重組人 Coagulation Factor XIII B chain / F13B 蛋白

CD276 Protein Rat 重組大鼠 B7-H3 / CD276 蛋白

BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A 0.5mgBMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受體1A抗原

F13B Protein Human 重組人 Coagulation Factor XIII B chain / F13B 蛋白

SERPINB8重組小鼠 SerpinB8 蛋白 Protein

CD276 Protein Rat 重組大鼠 B7-H3 / CD276 蛋白

NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽) Protein

Detroit 562 (人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞)小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat phosphatidylinositol aibody IgG/IgM (PI Ab-IgG/IgMELISA Kit 大鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM檢測試劑盒

humahyroid-stimulatinghormonereceptoraibody,TSHRELISAKit 人促甲狀腺激素受體抗體(TSHR)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-neuophilaibody,ANA檢測試劑盒人抗中性粒細(xì)胞抗體(ANA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit人高敏甲狀腺素(u-T4)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit   ELISA.   96T/48T