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ELISA試劑是怎樣分離純化酶
點擊次數:945 更新時間:2016-08-23

ELISA試劑是怎樣分離純化酶
常用的鹽析劑是硫酸銨,其溶解度大、價格便宜。硫酸銨沉淀蛋白質的能力很強,其飽和溶液能使大多數的蛋白質沉淀下來。對酶沒有破壞作用。
pH的控制:應從酶的溶解度與穩定性兩個方面考慮,ELISA試劑在酶等電點時其溶解度zui小易沉淀,但有些酶再等電點時穩定性較差,因此要選擇H值.一般要求在酶zui穩定的pH值的前提下再考慮zui適宜酶沉淀的pH值。在操作中一旦確定H值后,在添加硫酸銨之前甲酸或堿調節好酶液的pH值,要盡量避免溶液pH值的波動以免破壞酶的穩定性。在添加硫酸銨時要注意攪拌,并注意硫酸銨的加入速度,一般是由少到多,緩慢加入,硫酸銨盡可能磨成細粉。
溫度的控制:有些酶在較高溫度下穩定性能較好,ELISA試劑可在常溫下進行鹽析操作,而對于大多數酶,盡可能在低溫下操作。
酶液的凈置:加完硫酸銨后,酶液要靜置一段時間,使酶蛋白*沉淀下來,酶靜置后,就不要再加以攪拌。
2.有機溶劑沉淀
ELISA試劑有機溶劑選擇:可用于酶蛋白沉淀的有機溶劑包括醇類物質等,如甲醇、乙醇、異丙醇。乙醇的親水性能較好,可防止蛋白質的變性,酶蛋白在其中的溶解度也較低。
有機溶劑沉淀操作:有機溶劑一般都使蛋白質變性,當溫度較高時變性蛋白質分子就會變成*失活。因此用有機溶劑處理時在0℃以下進行。用有機溶劑沉淀得到的酶蛋白不要放置過久,要盡快加水溶解。
3.聚合物絮凝劑沉淀 聚合物絮凝劑,ELISA試劑如葡聚糖和聚乙二醇,與酶分子爭奪水分子,具有脫水作用使酶沉淀。聚乙二醇作為一種沉淀劑的優點是在水溶液中,其濃度可達到50%,濃度為6%-2%的蛋白質大都可以沉淀下來。這種試劑不需要低溫操作,而且對蛋白質的穩定還有一定的保護作用。聚乙二醇不會被吸附,故在離子交換吸附前不必去除。

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